ABSTRACT
A variabilidade clínica descrita na doença falciforme (DF) tem sido associada ao efeito epistático de vários genes, a exemplo do gene Klotho (Kl), cujos polimorfismos interferem na regulação de canais de potássio (K+), cálcio (Ca2+) e fósforo, na expressão de vitamina D (VitD) e paratormônio (PTH), e na supressão do estresse oxidativo. Com isto, o presente estudo teve por objetivos investigar a frequência de SNPs no Kl em indivíduos com hemoglobinopatia SC (HbSC), associando-os a marcadores de gravidade e subfenótipos da doença e investigar associações entre os níveis de K+, Ca2+, fósforo, VitD e PTH com tais marcadores de gravidade. Foi desenvolvido um estudo de corte transversal com 113 indivíduos com HbSC provenientes da Fundação HEMOBA, Salvador-Ba. As análises hematológicas foram realizadas em contador eletrônico de células; o perfil de hemoglobinas foi confirmado pela cromatografia líquida de alto desempenho; os marcadores lipídicos, de hemólise, de função hepática e renal, Ca2+ e fósforo foram avaliados por método colorimétrico, assim como o K+, por eletrodo de íon seletivo; as concentrações de VitD e PTH foram investigadas por quimioluminescência e de anti-estreptolisina-O (ASLO) e proteína C reativa (PCRe) por nefelometria; os SNPs no Kl (rs1207568, rs9527025, rs564481 e rs648202) foram genotipados pelo ensaio de discriminação alélica pelo sistema TaqMan; os haplótipos dos genes da globina beta foram investigados pela reação da polimerase em cadeia - com restrição dos fragmentos com endonucleases de restrição (PCR-RFLP). Os dados clínicos foram coletados em prontuários médicos. O SNP rs1207568 foi associado à ocorrência de infecções (P=0,0170) e a níveis séricos elevados de albumina (P=0,0370), o SNP rs648202 foi associado ao uso de medicações (P=0,0208) e o SNP rs9527025 a níveis elevados de fósforo e bilirrubina direta (BD) (P=0,0044 e P=0,0092, respectivamente). O K+ foi positivamente correlacionado com os leucócitos (r=0,2916,P=0,0034), linfócitos típicos (r=0,2644, P=0,0082), monócitos (r=0,2370,P=0,0182), plaquetas (r=0,4889, P<0,0001), colesterol total (r=0,2521, P=0,0118), colesterol LDL (Col-LDL) (r=0,2953, P=0,0030), fósforo (r=0,2447, P=0,0277), proteínas totais (PTs) (r=0,2415, P=0,0160), ferritina (r=0,2263, P=0,0283), PCRe (r=0,2369, P=0,0222) e HbS (r=0,2474, P=0,0135). O K+ teve correlação negativa com hemácias (r=-0,2076, P=0,0392) e Hb fetal (r=-0,2328, P=0,0204). O Ca2+ apresentou correlação positiva com PTs (r=0,2991, P=0,0028) e albumina (r=0,3242, P=0,0011) e negativa com o ASLO (r=-0,2216, P=0,0309). O fósforo foi negativamente correlacionado com Hb (r=-0,3083, P=0,0051), hematócrito (r=-0,2610, P=0,0186), bilirrubina indireta (r=-0,2685, P=0,0154) e creatinina (r=-0,3844, P=0,0004)...
The clinical variability described in sickle cell disease (SCD) has been linked to epistatic effect of various genes, such as Klotho (Kl), whose polymorphisms affect the potassium (K+), calcium (Ca2+) and phosphorus channels regulation, the vitamin D (VitD) and parathyroid hormone (PTH) expression, and oxidative stress suppression. With this, the present study aims to investigate the Kl SNPs frequency in hemoglobinopathy SC (HbSC) individuals, associating them with markers of severity and disease sub-phenotypes, and to investigate associations between K+, Ca2+, phosphorus, VitD and PTH levels with such gravity markers. We developed a cross-sectional study of 113 individuals with HbSC from HEMOBA Foundation, Salvador - Ba. The hematological values were determined in electronic cell counter; the hemoglobin (Hb) profile were confirmed by high performance liquid chromatography; the lipid, hemolysis, liver and kidney markers, Ca2+ and phosphorus were evaluated by colorimetric method, as well as the K+ by ion selective electrode; the VitD and PTH concentrations were investigated by chemiluminescence and the anti-streptolysin O (ASO) and C-reactive protein (PCRe) by nephelometry; the Kl SNPs (rs1207568, rs9527025, rs564481 and rs648202) were genotyped by allelic discrimination assay by TaqMan system for genotyping; the beta globin genes haplotypes were investigated by polymerase chain reaction - restriction fragment length polimorphism (PCR-RFLP). Clinical data were collected from medical records. The SNP rs1207568 was associated with the infection occurrence (P=0.0170) and raised serum albumin levels (P=0.0370), the SNP rs648202 was associated with the medications use (P=0.0208) and the SNP rs9527025 with raised direct bilirubin (BD) and phosphorus levels (P=0.0044 and P=0.0092, respectively). The K+ was positively correlated with leukocytes (r=0.2916, P=0.0034), typical lymphocytes (r=0.2644, P=0.0082), monocytes (r=0.2370, P=0,0182), platelets (r=0.4889, P<0.0001), total cholesterol (r=0.2521, P=0.0118), LDL cholesterol (Col-LDL) (r=0.2953, P=0.0030), phosphorus (r=0.2447, P=0.0277), total proteins (PTs) (r=0.2415, P=0.0160), ferritin (r=0.2263, P=0.0283), PCRe (r=0.2369, P=0.0222) and Hb (r=0.2474, P=0.0135). The K+ had a negative correlation with red blood cells (r=-0.2076, P=0.0392) and fetal Hb (r=-0.2328, P=0.0204). The Ca2+ was positively correlated with PTs (r=0.2991, P=0.0028) and albumin (r=0.3242, P=0.0011) and negatively with the ASO (r=-0.2216, P=0,0309). The phosphorus was negatively correlated with Hb (r=-0.3083, P=0.0051), hematocrit (r=-0.2610, P=0.0186), indirect bilirubin (r=- 0.2685, P=0.0154) and creatinine (r=-0.3844, P=0.0004)...